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Zelltrennung und PAP PEN

 
Stift für Lichtmikroskopie und Immunchemie, PAP PEN
Der Stift erzeugt eine wasserabweisende Barriere und hält Proben / Antikörper etc. innerhalb der gekennzeichneten Fläche. Der Pap Pen ist einsatzfähig für PAP-, ABC-, BSA-, Immunfluoreszenzmethoden sowie DNA-Techniken. Die Markierung ist wasser-, alkohol-, acetonfest und temperaturunempfindlich.
Pap Pen stoppt Probenausbreitung
reduziert die Probenmenge
teilt Objektträger in individuelle Sektionen für Immunfärbungen
verwendbar in Histologie, Zytologie, Virologie und Mikrobiologie
Kat. #BeschreibungEuroAnzahl
MKP-1Pap Pen Immunostaining Pen46,00
MKP-2Pap Pen Immunostaining Pen, extra thick59,90
 
Neubauer Zählkammer
Diese Neubauer Zählkammer ist ein Einmalprodukt mit zwei Zählkammern aus Kunststoff mit Quarzglaseigenschaften, ausgelegt für normiertes und standarisiertes Zählen.
Die Handhabung ist einfach, 10 µl der Zellsuspension werden auf dem Chip aufgetragen und ausgezählt. Das Koordinatensytem entspricht exakt der "Neubauer Improved" Zählkammer. Es besteht aus neun Quadraten zu je 1 x 1 mm mit 0,1 mm Tiefe. Jedes Quadrat hat ein Gesamtvolumen von 0,3 cmm bzw. 10E-4 ccm. Das Zentralquadrat ist in 25 kleine Quadrate mit Dreifachlinien unterteilt und die 4 Eckquadrate sind in 16 kleine Quadrate unterteilt.

Methodik 1. Allgemeine Methode mit dem C-chip: Probe gut mischen, die Kammer mit 10 µl unter Ausnutzung der Kapillarwirkung befüllen, Zellen unter dem Mikroskop auszählen

2. Mammalia-Zellzählung: Zellprobe mit Typsin-EDTA behandeln, Überstand vorsichtig ohne Störung des Pellets abpipettieren, Pellet mit Wachstum-Medium oder PBS zu einer Endkonzentration von 5 x 10E3 Zellen / ml bis 5 x 10E6 Zellen/ ml verdünnen

3. Erythrozytenzählung ( 1:200 Verdünnung): Blut nach bekannter Labormethode verdünnen, Chip mit 10 µl der Verdünnung beladen, Auszählung der Verdünnung auf den fünf kleinen Quadraten ( vier kleine Eck-Quadrate und ein kleines Zentrumsquadrat) des großen Zentrumsquadrates

4.Leukozytenzählung (1:20 Verdünnung): Blut nach bekannter Labormethode verdünnen, Chip mit 10 µl der Verdünnung beladen, Auszählung der Verdünnung auf den 4 großen Eck-Quadraten.
Kat. #BeschreibungVEEuroAnzahl
M-NZC-Chip50 Stück78,00
 
Trennung von Mononuklearen Zellen (MNC) aus Vollblut mit Filter-Tubes
50 ml und 15 ml Blut-Separations-Filter-Tubes haben einen speziellen Filter, der die Trennung von mononuklearen Zellen (MNC) vereinfacht. Die Methode wurde von ESQUIRE (Leuco-sep) entwickelt.

  • Folgendes Protokoll wird unter Raumtemperatur durchgeführt.
  • 1. 16 ml Lymphoprep* werden in das Blut-Separations-Tube pipettiert, (3 ml für das 15 ml Tube)
  • 2. Das Tube wird bei 1000 x g für 30 Sekunden zentrifugiert.
  • 3. 15-30 ml frisches antikoaguliertes Blut werden in das Tube gefüllt(3-8 ml für das 15 ml Tube). Das Blut muss nicht verdünnt werden, aber kann direkt mit BSS (Bufferd Salt Solution) in das Tube gegeben werden.
  • 4. Tube bei 1000 x g für 10 Minuten (oder 800 x g für 15 Minuten) zentrifugieren
  • 5. Nach der Zentrifugation ist die Schichtabfolge im Tube wie folgt:
    Plasma-MNC-Lymphoprep-Filter-Lymphoprep-Erythrozyten.
  • 6. MNC kann jetzt abpipettiert oder mit einer Pasteurpipette zur Weiterbearbeitung in ein anderes Röhrchen überführt werden.
  • 7. MNC wird nun mit 10 ml PBS gewaschen und die Zellen resuspendiert durch vorsichtiges Ansaugen mit der Pasteurpipette. Anschließend bei 250 x g für 10 Minuten zentrifugieren.
  • 8. Dieser Schritt wir zweimal wiederholt, wobei das Pellet in 5 ml PBS-Puffer resuspendiert wird.
  • 9. Die Lymphozyten sind jetzt fertig zur Aufnahme oder Lagerung im Kryoröhrchen.
    *Separations-Lösung its erhältlich als: Lymphoprep (Nycomed Amersham)
    Kat. #BezeichnungVEEuroAnzahl
    M-BST15Blut Separations-Tubes, 15 ml, steril10 x 10 Tubes249,00
    M-BST50Blut Separations-Tubes, 50 ml, steril4 x 25 Tubes144.80
     
    Combed, Scrubbed Nylon Wool Fiber, Type R Trennung von T-Zell- u. B-Zell-Lymphozyten mit Combed, Scrubbed-Nylon-Wool-Fiber
    Gekämmte Nylonwolle ist ein ideales Trennmedium für Lymphozyten. Mittels Nylonwolle können B-Zellen von T-Zellen auf einfache und schnelle Weise für die immunologische Forschung getrennt werden. Mausgranulozyten und B-Zellen bleiben an den Nylonfasern hängen, während T-Zellen die Nylonwolle passieren. Die Nylonwolle ist prinzipiell gebrauchsfertig und kann bei Bedarf autoklaviert oder vorbehandelt werden.

    Mononuclear lymphoid cells may be preseparated from the polymorphonuclear (PMN) leukocytes and contaminating erythrocytes by centrifugation on an isopynknotic solution of IsoPrep (specific gravity 1.077gm/liter). If an isopynknotic solution is not used, the polymorphonuclear (PMN) leucocytes will adhere tightly to the nylon wool, while any erythrocytes will be eluted with the nonadherent cell fraction. Prior to the fractionation procedure, the mononuclear cells are washed once in Hank`s Balanced Salt Solution, counted and resuspended in Hank`s Balanced Salt Solution supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) or in other cell growth media like RPMI 1640 with 10% FCS, Earl`s Saline with 10% FCS or Dulbecco`s PBS with 5% FCS.

    Our Nylon wool works well with e.g. human, mouse and rat cells. Please see also: current protocols in Immunology (1992) 3.2.1-3.2.4, contributed by K.S.Hathcock, T-Cell Enrichment by nonadherence to Nylon, John Wiley & Sons, Inc.
    Cell Separation Procedure

    1) T-cell enriched fraction
    Pack tightly 0,5gram of sterile Nylon wool to a 10ml sterile syringe. Wash and equilibrate the Nylon Wool with selected media HBSS or RPMI 1640 with 10% FCS.
    1-2 x 108 mononuclear cells suspended in 2ml of media are pipetted onto 0,5grams of sterile Nylon wool.
    Incubate the syringe at 37°C for 45 to 60 minutes.
    Collect nonadherent T-cells by washing with HBSS and resuspend. Do not plunge.
    B-Cells are reduced in the syringe up to 3%, larger numbers of cells may be separated, when the amount of nylon wool (e.g.1g) and the size of the syringe is proportionally increased or by repeating the procedure.

    2) B-cell enriched fraction

    After elution of the not adherent T-cells from the Nylon Wool Fiber, the syringes are stoppered and filled with HBSS supplemented with 10% FCS. The syringes are opened and sterile plungers of the syringes are used to force the medium through the Nylon Wool Fibers. The cells are washed once in in HBSS and resuspended.
    Kat. #BeschreibungVEEuroAnzahl
    MKN-10Nylon Wool Fiber10g42,70
    MKN-50Nylon Wool Fiber50g136,00
    MKN-100Nylon Wool Fiber100g240,00
     
    Objektträgerkästen farbig, für 100 Objektträger
    Die Objektträgerkästen weisen im Boden eine Korkeinlage zum Schutz der Objektträger auf.
    Im Deckel befindet sich eine korrespondierende, nummerierte Inventurkarte.
    Die stapelbare Polypropylenbox wird durch einen vernickelten Clip verschlossen.

    Abmessungen: 222 x 171 x 33 mm (L x B x H)
    Kat.#FarbeVEEuroAnzahl
    R100-Bblau14,95
    R100-Ggrün14,95
    R100-Ygelb14,95
    R100-Rrot14,95
    R100-Wweis14,95
    R100-GRAgrau14,95
    R100-SCHschwarz14,95
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    © 1999 - 2011 Dipl. oec. troph. Gerlinde Kisker