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Trennung von T-Zell- u. B-Zell-Lymphozyten mit Combed, Scrubbed-Nylon-Wool-Fiber
Gekämmte Nylonwolle ist ein ideales Trennmedium für Lymphozyten. Mittels Nylonwolle können B-Zellen von T-Zellen auf einfache und schnelle Weise für die immunologische Forschung getrennt werden. Mausgranulozyten und B-Zellen bleiben an den Nylonfasern hängen, während T-Zellen die Nylonwolle passieren. Die Nylonwolle ist prinzipiell gebrauchsfertig und kann bei Bedarf autoklaviert oder vorbehandelt werden.
Literatur siehe auch:
Current Protocols in Immunology (1992) 3.2.1-3.2.4
Karen S. Hathcock: "T Cell Enrichment by Nonadherence to Nylon
Kurzprotokoll:
1) Methode
• 0,5 bis 1g Nylonwolle fein zerzupfen, in eine 10 ml Spritze stopfen und autoklavieren. Waschen und äquilibrieren der Nylonwolle mit HBSS, RPMI 1640 angereichert mit 10% FKS oder T-Zell Medium
• 1-2 x 10⁸ mononukleare Zellen in 2 ml Medium suspendieren und in die Spritze pipettieren
• Inkubation der Spritze bei 37 °C für 45 - 60 min.
• Nicht-adhärente T-Zellen durch Waschen mit HBSS sammeln und resuspendieren. Spritze langsam auslaufen lassen - nicht drücken, dabei Medium nachfüllen; Vorgang eventuell wiederholen
2) Lösungen
• T-Zell-Medium
• RPMI, 5% FKS, L-Glu, NEAA, Pen / Strep, HEPES, SodPyr
• PBS und PBS + 1% FKS
• Lysis Puffer
